猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 王亚涛 陶洁 李本强 程靖华 石迎 刘惠莉
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 间接ELISA S2截短蛋白 IgG
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 269-274
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0047

摘要

本研究基于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S2截短蛋白,建立了特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,用于临床PEDV特异性抗体水平的监测.前期筛选了富含中和表位的S2截短基因,体外表达后作为ELISA包被抗原,用于捕获PEDV IgG抗体,以山羊抗猪HRP-IgG作为二抗,通过条件优化,建立了检测猪血清中PEDV IgG抗体的间接ELISA方法.最佳反应条件为:S2抗原蛋白的最佳包被浓度为2μg/mL,临床血清样品和酶标二抗的最佳稀释倍数分别为1∶400和1∶20 000.该方法的批内和批间重复变异系数(CV)分别为1.81％～8.52％和1.18％～7.41％,重复性较好;该方法检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清时结果均为阴性,特异性较强.该方法与商品化PEDV抗体检测试剂盒相比较,阳性符合率为95.18％,阴性符合率为91.43％,说明该方法可用于临床血清抗体筛查.进一步利用此方法对324份猪的临床血清样品进行检测,发现PEDV抗体阳性血清占62.96％,与临床现状基本吻合.上述结果表明,该方法适用于临床猪群中PEDV IgG抗体水平普查,为PEDV的疫病防控及灭活疫苗评价提供了有效的技术支持.