中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 张明华 韦小平 周碧君 文明 程振涛 田琴 王开功
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 中蜂囊状幼虫病毒 RT-PCR VP3基因 中华蜜蜂
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 275-280
• 页数: 6页
• 分类号: S895.133
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0056

摘要

为建立中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)核酸的特异性检测方法,以CSBV结构蛋白VP3基因为靶基因,根据GenBank中序列合成1对特异性引物,建立了CSBV RT-PCR检测方法.以CSBV克隆质粒作为模板和蜜蜂6种不同病毒,分别进行特异性、敏感性、重复性试验.结果 显示:所建立的RT-PCR检测方法能扩增出CSBV特异性片段,且不能扩增出蜜蜂以色列急性麻痹病毒、蜜蜂畸翅病毒、蜜蜂急性麻痹病毒、蜜蜂慢性麻痹病毒、黑蜂王台病毒、蜜蜂克什米尔病毒;CSBV阳性质粒最低检测质量浓度为2.82 fg/mL;对CSBV阳性质粒和双蒸水空白对照组重复检测3次,均能扩增出与预期一致的特异性片段.利用该检测方法对从贵州省不同养蜂场采集的100份中华蜜蜂样本进行检测,71份样本为阳性,通过序列比对分析,同源性高达99.16％,进一步证实为CSBV.结果 表明,所建立的CSBV检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,具有良好的实用性.