金黄色葡萄球菌SarA蛋白原核表达及免疫原性研究

• 作者: 程旭 杨雨晴 吴赛男 侯勤龙 李咏梅 韩慧明
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: SarA 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.11713/j.issn.1009-4822.2021.01.009

摘要

目的 构建SarA的原核表达载体,对SarA蛋白免疫原性进行初步研究.方法 首先应用生物信息学方法 对SarA基因进行分析;以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR扩增、酶切、连接等一系列反应进行原核重组质粒的构建;IPTG诱导原核重组质粒表达,对SarA蛋白进行纯化、浓缩,将浓缩后的蛋白与佐剂混合免疫家兔,收集血清,通过间接ELISA法检测血清抗体效价,并通过Western blot鉴定抗体特异性.结果 成功构建重组表达质粒SarA-pET32a(+),通过IPTG诱导表达,获得以可溶形式高效表达的SarA蛋白,分子质量约为32 kDa.用纯化的SarA蛋白免疫家兔,获得了SarA多克隆抗体,其效价为1:512000.结论 成功构建了SarA原核表达载体,且在大肠杆菌细胞中表达;得到了高效价和良好特异性的多克隆血清抗体,为进一步研究抗细菌生物膜疫苗奠定了基础.