鳗鲡疱疹病毒ORF8基因的克隆表达及转录时相分析

• 作者: 陈曦 李英英 陈强 宋铁英 葛均青
• 来源期刊: 大连海洋大学学报
• 关键词: 鳗鲡疱疹病毒 ORF8基因 转录时相 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Articles
• 页码范围: 10-15
• 页数: 6页
• 分类号: S941.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2020-064

摘要

为研究鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)ORF8基因的特性,根据GenBank中AngHV参考株(NC_013668)的ORF8序列设计引物,采取PCR方法从分离的AngHV福建病毒株(AngHV-FJ)基因组中扩增出特异性片段,克隆至pMD19-T载体,经酶切和测序验证,获得了ORF8的基因序列.结果表明:经生物信息学分析,ORF8编码的蛋白稳定性较好,存在跨膜结构且抗原表位多,符合病毒囊膜蛋白的特征;经转录时相分析,ORF8是病毒的早期基因(early gene,E),可能在病毒感染的早期阶段就发挥作用;将ORF8克隆至表达载体pET-32a,转化人大肠杆菌E.coli BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE及Western blot检验,实现了ORF8在大肠杆菌中的高效表达,进一步通过割胶的方法获得了相对分子质量约为44 000的高纯度融合表达蛋白.本研究为下一步评价该表达蛋白的免疫效果和制备抗体,以及开发免疫诊断试剂和疫苗提供了研究基础.