油菜黑胫病菌和茎基溃疡病菌的LAMP检测方法的建立

• 作者: 杜然 张静 杨龙 吴明德 李国庆
• 来源期刊: 植物病理学报
• 关键词: 油菜黑胫病 油菜茎基溃疡病 油菜 Leptosphaeria biglobosa Leptosphaeria maculans 环介导等温扩增技术(LAMP)
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法|EXPERIMENTAL METHOD
• 页码范围: 123-134
• 页数: 12页
• 分类号: S432.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000514

摘要

油菜黑胫病和油菜茎基溃疡病分别由子囊菌Leptosphaeria biglobosa和L.maculans引起.我国油菜产区仅发现L.biglobosa,未发现L.maculans.因而,L.maculans是我国的对外检疫性对象.这两种真菌形态相似,引起的病害症状相似,给田间快速准确鉴定带来难度.本研究基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),建立了快速检测L.biglobosa和L.maculans的方法.根据ITS-rDNA序列设计了 5条检测L.biglobosa的LAMP引物和6条检测 L.maculans的LAMP引物,检测L.biglobosa和L.maculans的最适温度为65℃,反应时间分别为40 min和50 min.两组引物检测特异性高,检测的模板DNA极限达到fg级,与常规PCR检测相比,LAMP检测L.biglobosa和L.maculans 灵敏度分别提高了 100倍和1000倍.在病害样品实际检测中,采用两种LAMP体系,分别检测了 9株罹病油菜茎秆中的病原菌.结果表明:所有茎秆中的病原菌均为L.biglobosa,没有检测到L.maculans,与特异性PCR检测结果一致.本研究建立的LAMP检测方法为快速高通量检测L.biglobosa和L.maculans奠定了基础.