嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169的生物信息学分析及其原核表达

• 作者: 康超 荣娜 简思杰 孙薇 刘祥 陈琛 陈春琳
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜水气单胞菌 外膜蛋白AH6169 多克隆抗血清 抗原性
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 80-88
• 页数: 9页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文

摘要

为嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169亚单位疫苗的研究奠定理论基础,采用生物信息学方法分析了AH6169的理化性质、结构与功能;分子克隆构建AH6169表达菌株,正交试验筛选其最佳诱导表达条件;通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化AH6169蛋白;小鼠免疫蛋白制备多克隆抗血清;Western blotting鉴定抗血清特异性与效价;酶联免疫法体外模拟AH6169抗血清与重要水产病原菌的相互识别作用.结果表明,AH6169属跨膜蛋白,无规则卷曲占全序列46.79％,延伸25.49％,α-螺旋22.69％;不同种类的气单胞菌AH6169蛋白保守性较高;成功构建AH6169表达菌株,最佳表达条件为诱导时菌液浓度OD600=0.8,IPTG浓度0.1 mmol·L-1,32℃诱导8 h;纯化获得AH6169蛋白,制备的AH6169小鼠抗血清具有较好的特异性,且效价达到1:1600;AH6169蛋白抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和溶藻弧菌存在相互识别作用.说明AH6169蛋白有较好的抗原性,AH6169可为不同种类的气单胞菌提供交叉免疫保护作用,并且其细胞表位较为丰富,可能是一种潜在的疫苗候选成分.