TaqMan-rRT-PCR检测猪霍乱沙门菌方法的建立和实验室评价

• 作者: 张景山 李旭 闫梅英 阚飙 樊粉霞
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 关键词: 猪霍乱沙门菌 TaqMan 检测
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Studies
• 页码范围: 410-415
• 页数: 6页
• 分类号: R378.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.063

摘要

目的 基于猪霍乱沙门菌血清型特异性基因,建立TaqMan逆转录实时聚合酶链反应(TaqMamrRT-PCR)检测猪霍乱沙门菌的方法.方法 利用基因组序列比对筛选到猪霍乱沙门菌特有的基因SC0358,通过普通PCR及利用多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株共计145株,评价该方法的菌株特异性,针对该基因设计TaqMan-rRT-PCR检测方法的引物,优化反应条件,建立针对该靶基因的TaqMan-rRT-PCR检测方法,以纯菌及血液模拟标本RNA为模板进行敏感性检测.结果 利用该方法检测26株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株扩增均阴性,对纯菌RNA检测中,TaqMan-rRT-PCR的最低检测限度为5 fg/反应,约为10个拷贝/反应.对全血液模拟样品分析中,敏感性达25 cfu/mL.结论 以猪霍乱沙门菌保守、特异基因SC0358建立的TaqMan-rRT-PCR方法,能够简便快捷区分猪霍乱沙门菌与其他血清型沙门菌,尤其能够区分与其有抗原式相同的丙型副伤寒沙门菌,此方法为猪霍乱沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对猪霍乱沙门菌的早期诊断.