应用CRISPR/Cas13a快速鉴定布鲁氏菌

• 作者: 黄明耀 梁文立 吴婉婷 刘足 谢淑媚 邓颖颖 傅俊方 姜长宏 龙军 江凌晓
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 关键词: 布鲁氏菌 CRISPR/Cas13a 快速诊断
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Studies
• 页码范围: 426-429
• 页数: 4页
• 分类号: R378.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.062

摘要

目的 建立一种基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌鉴定方法.方法 以布鲁氏菌BCSP31基因的保守区为靶标区域设计特异的引物和crRNA,建立鉴定布鲁氏菌的CRISPR/Cas13a方法.通过对纯菌株以及临床需氧血培养阳性菌液检测评价该方法的特异性和敏感性;通过梯度稀释法评估其检测下限.结果 建立了基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌快速鉴定方法,其检测下限可达10 fg/μL.通过鉴定64株布鲁氏菌、56株非布鲁氏菌、人DNA以及57例临床需氧血培养阳性菌液,计算该方法的敏感性、特异性可达100％00.结论 建立了一种基于CRISPR/Cas13a的布鲁氏菌鉴定方法,可用于临床需氧血培养阳性后快速鉴定布鲁氏菌.