牛乳腺炎标志物血清淀粉样蛋白A3的原核表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 樊一明 刘鑫楠 魏治静 包永占 董维亚 张小兵 吴萌
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 牛血清淀粉样蛋白A3 (M-SAA3) 乳腺炎 原核表达 单克隆抗体(MAb)
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 临床兽医学
• 页码范围: 395-402
• 页数: 8页
• 分类号: S852.43
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0034

摘要

为了表达牛乳腺相关血清淀粉样蛋白A3(M-SAA3)基因,获得其重组蛋白及单克隆抗体(MAb),本研究将编码M-SAA3的基因片段经密码子优化后接入载体pET-30a(+)中,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达.以镍柱纯化蛋白后,免疫BALB/c小鼠制备M-SAA3 MAb.结果 显示,扩增的M-SAA3基因序列无误;M-SAA3基因成功转入表达载体;菌液的诱导表达D600值=0.8为最优条件;重组蛋白纯度可达98％,浓度为1.146 mg/mL;制得7株MAb效价均＞1∶1 600,亚型均为IgG3,研制的3B2B4 MAb可分别与M-SAA3的重组及天然蛋白特异性结合.该成果为将来针对M-SAA3的奶牛乳腺炎检测产品研发提供了重要原料.