基于蛋白质二级结构热稳定性的正交方法

• 作者: 陈中 卢星宇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 圆二色 热变性 程序升温 蛋白
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 236-245
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0543

摘要

对蛋白质热稳定性的研究是解析蛋白高级结构,开发蛋白功能及新药物研发过程中的一个重要环节,是对其结构分析的一个重要关切点.观测蛋白质的圆二色光谱随温度程序变化而改变是研究其热稳定性的常用手段,传统的实验方法为选用某一单波长作为测试点,通过连续升温测试蛋白在单波长下的圆二色变温曲线,然后拟合出Tm值,此方法所得的信息有限,并且如何选取该单波长点是一个有争论的问题.本实验开发和优化了蛋白质二级结构热稳定性测试的一种正交方法,以牛血清蛋白及血红蛋白为研究对象,利用180-260 nm范围内的圆二色全光谱热变性测试来考察蛋白质构象随温度的变化而改变的过程.结果显示,当吸光度在合适的范围内,蛋白的热变性中点温度(Tm值)不受浓度的影响.作为对比,在180-260 nm范围内采用单波长法重复牛血清蛋白的热变性测试,结果表明,除了端点和交叉点外,其余波长的单点法的结果与全光谱正交法所测出的蛋白的Tm值是一致的,说明此两种方法在Tm值的测定上都是可靠的.以上通过对两种方法的全面对比发现,全光谱正交法不仅可以测定选定范围的每个波长的变温曲线,而且可以观测蛋白质的整体结构热变性过程,而用单波长法在同样的实验时间不能有效地记录蛋白构象在热变性过程中的变化过程.