非洲猪瘟病毒p72蛋白N末端的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 姜林林 宋帅 蔡汝健 蒋智勇 李艳 勾红潮 楚品品 李春玲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p72蛋白N末端 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 144-152
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0038

摘要

根据非洲猪瘟病毒Pig/HLJ/2018株p72-N末端基因的核苷酸序列,合成p72-N末端648 bp基因序列,连入pET-28a(+)载体进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定后,用重组蛋白p72-N末端作为包被抗原,建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法.结果显示,非洲猪瘟病毒p72-N末端648 bp基因片段成功克隆到pET-28a(+)载体中,经诱导表达获得约27 ku的重组蛋白,Western-blotting结果显示,重组蛋白与非洲猪瘟抗体阳性血清具有良好的反应原性.建立的ELISA方法结果显示,重组蛋白p72-N末端的最佳包被浓度为2.5 μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100,该方法特异性好,仅与非洲猪瘟抗体阳性猪血清发生特异性反应,敏感度可达1∶1600;批内重复性和批间重复性变异系数均小于10％,与西班牙INGENASA公司非洲猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒符合率可达93.75％.结果表明,获得的重组蛋白p72-N末端具有良好的反应原性和免疫原性,建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.