单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

• 作者: 张海洋 刘爽 戚雪芹 王权 陈兆国 韩先干 蒋蔚
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 单核细胞增生李斯特菌 单克隆抗体 多克隆抗体 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 962-969
• 页数: 8页
• 分类号: S852.617
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0131

摘要

为建立奶制品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,分别制备抗LM的单克隆抗体和家兔多克隆抗体,以方阵滴定法确定最佳单抗包被浓度和多抗工作浓度,从而建立LM的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法.结果 表明,抗LM的单抗和多抗效价分别为1∶128000和1∶2560000,分别以抗LM单抗和多抗作为捕获抗体与检测抗体;经优化后选择抗LM单克隆抗体稀释至1∶1000、抗LM兔多抗稀释至1∶4000建立ELISA检测方法.结果 显示:所建立的双抗体夹心ELISA方法对LM的最低检测限可达到1×105 CFU/mL,与常见的10种食源性病原微生物均无交叉反应,表明该方法的特异性良好.重复性试验结果显示,该方法的批内、批间变异系数均小于10％,表明该方法具有良好的重复性.模拟样品试验结果表明,在牛奶样本中添加LM至细菌浓度为1×100 CFU/mL时,增菌培养10h后用本方法即可检出阳性;牛奶样本的添加回收试验进一步表明回收率可达70.22％～91.59％,提示本方法可有效用于牛奶样本中LM的检测.综上,利用抗LM的单抗和兔多抗成功建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为牛奶中LM的监测提供技术支撑.