肝癌细胞中丛生蛋白的差异性表达检测和启动子表达质粒的构建

• 作者: 于秋丽 王峰
• 来源期刊: 中国临床新医学
• 关键词: 肝癌 差异性表达基因 启动子 表达质粒
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 博硕论坛·论著
• 页码范围: 292-296
• 页数: 5页
• 分类号: R73-37
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-3806.2021.03.15

摘要

目的 检测肝癌细胞HepG2中丛生蛋白(CLU)的表达情况并构建肝癌差异性表达基因CLU启动子表达质粒,为后续进行CLU基因差异性表达及机制研究奠定基础.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CLU mRNA在肝细胞癌(HCC)HepG2细胞和正常肝细胞L02中的表达水平.应用生物信息学分析和序列测序获得CLU基因启动子序列,并将其插入到pGL3-Basic质粒中.通过酶切、琼脂糖凝胶电泳及测序对构建完成的pGL3-CLUP质粒进行验证.结果 RT-qPCR结果表明HepG2细胞CLU mRNA的表达量约是L02细胞的9.38倍,差异有统计学意义(P<0.05).pGL3-CLUP质粒经单酶切后为一条电泳条带,长度为5000～6000 bp;双酶切后的质粒为两条电泳条带,一条为5000 bp左右,另一条为1000～1500 bp,大小与质粒和启动子大小一致.测序结果也表明CLU启动子已插入到pGL3-Basic质粒启动子区.结论 CLU在HCC细胞中高表达.pGL3-CLUP启动子表达质粒构建成功.