CsgRNA减少APOBECs在Cas9-D10A介导的基因编辑过程中引入的突变

• 作者: 任蓉蓉 陈红全
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 关键词: CRISPR/Cas9 APOBECs csgRNA 基因突变
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 724-728
• 页数: 5页
• 分类号: R81
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2021.09.006

摘要

目的:通过csgRNA策略降低APOBECs蛋白对Cas9-D10A/sgRNA系统进行基因编辑时产生的突变.方法:针对Cas9-D10A/sgRNA4和Cas9-D10A/sgFANCF打靶位点的非切割链设计csgRNA并对csgRNA的碱基长度和空间结合位置进行精细优化,在293FT-APOBEC3B过表达细胞系检测基因突变效率.结果:与对照组比,在sgRNA4和sgFANCF打靶位点上,csgRNA明显降低Cas9-D10A进行基因编辑时产生的切割条带;通过对csgRNA条件优化,发现当csgRNA长度为16 bp且作用位置向PAM端延伸2个碱基或csgRNA长度为20 bp且作用位置向PAM端延伸4个碱基时,其降低APOBEC-3B对Cas9-D10A/sgRNA产生的突变效果较好.结论:CsgRNA策略成功降低了APOBEC-3B对Cas9-D10A/sgRNA系统进行基因编辑时产生的突变.