猪流行性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 李飞 曾喻兵 江朝源 张儒博 彭珂楠 陈斌 朱玲 徐志文 程顺财
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 S基因 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1355-1360
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0191

摘要

为开发一种快速、准确、灵敏及定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的实时荧光定量PCR方法,根据GenBank中登录的S基因高度保守核苷酸序列,设计1对PEDV S基因的特异性引物,建立以SYBR GreenⅠ为染料的荧光定量RT-PCR检测方法,对疑似PEDV感染的临床样品进行检测并与普通RT-PCR结果进行比较.结果 显示,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数R2=1,其扩增效率E=2.03,熔解曲线为尖锐单峰;不与猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪丁型冠状病毒和猪轮状病毒发生交叉反应,具有较强的特异性;最低检出浓度(1×101 copies/μL)比普通RT-PCR方法灵敏100倍;批内批间重复性试验的变异系数均小于2％,重复性和稳定性好;将36份临床样品检测结果进行比较,与普通RT-PCR的总符合率为88.89％.结果 表明,建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏度高,对PEDV的快速及定量检测具有重要意义.