人肠道病毒71型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

• 作者: 王文伟 胡海涛 蔡蓓蓓 仝光杰 何成 楼觉人
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠道病毒71型 手足口病 病毒样颗粒 毕赤酵母 免疫原性
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 1406-1411
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并评价其免疫原性.方法 将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs.用不同剂量(0.05、0.5、5μg)的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体滴度.结果 EV71 VLPs表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确.纯化的EV71 VLPs在电镜下可见大小均一、直径约为30 nm的典型VLPs;动态光散射分析显示,EV71 VLPs的流体力学直径为35.82 nm;经0.05、0.5和5 μg EV71 VLPs免疫后,小鼠血清ELISA抗体的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为119、800和3200,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EV71 VLPs在巴斯德毕赤酵母中成功表达,且具有良好的免疫原性.