类胡萝卜素裂解双加氧酶基因AgCCD4调控芹菜不同组织的着色

• 作者: 王昊 尹莲 刘洁霞 贾丽丽 丁旭 沈迪 冯凯 徐志胜 熊爱生
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 芹菜 类胡萝卜素裂解双加氧酶基因 亚细胞定位 基因表达 类胡萝卜素
• 年，卷（期）: 2021,（15）
• 所属期刊栏目: 园艺|HORTICULTURE
• 页码范围: 3279-3294
• 页数: 16页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2021.15.012

摘要

[目的]研究类胡萝卜素裂解双加氧酶基因AgCCD4在不同颜色芹菜中的基因型及相对表达量,结合类胡萝卜素含量测定,分析AgCCD4对芹菜组织中类胡萝卜素积累的影响,为进一步研究CCD亚家族基因在不同颜色芹菜组织着色中的作用奠定基础.[方法]采用同源比对法检索芹菜基因组中的CCD家族基因AgCCD4.从'津南实芹''黄太极''紫杆一号'和'赛雪'4种不同颜色芹菜中分别克隆获得芹菜类胡萝卜素裂解双加氧酶基因AgCCD4.对芹菜AgCCD4的蛋白氨基酸序列组成、蛋白质理化性质、亲缘关系、空间结构等进行分析,预测其保守结构域和二级结构以及建立三级结构模型.采用荧光定量PCR技术检测AgCCD4在不同颜色芹菜不同组织中的表达水平.采用超高效液相色谱(UPLC)对4种颜色芹菜的叶片、叶柄和根中叶黄素和β-胡萝卜素的含量进行测定.采用农杆菌介导的瞬时表达转化法,研究AgCCD4蛋白在烟草表皮细胞中的亚细胞定位.[结果]序列分析结果表明AgCCD4包含1个长度为1779 bp的开放阅读框(ORF),编码592个氨基酸.'赛雪'中AgCCD4的核苷酸序列与其他品种相比存在18个碱基和9个氨基酸位点的差异,蛋白质相对分子质量分别为65.07 kD和65.12 kD,等电点分别为6.03和5.95.进化树分析表明,芹菜AgCCD4与菊科的向日葵和莴苣CCD4进化关系较近.AgCCD4蛋白的二级结构中包含多个α-螺旋和无规则卷曲,三级结构主要以β-折叠为主.亚细胞定位分析表明AgCCD4是一个定位在叶绿体上的蛋白.对4种颜色芹菜叶片、叶柄和根中叶黄素和β-胡萝卜素的含量进行测定,结果显示芹菜根中均未检测到叶黄素和β-胡萝卜素,叶片中叶黄素和β-胡萝卜素含量均以'津南实芹'最高,分别为1102.58μg·g-1 DW和241.92μg·g-1 DW,'紫杆一号'最低,分别为57.12μg·g-1 DW和45.65μg·g-1 DW.在叶柄中,仅在'黄太极'中检测到β-胡萝卜素,叶黄素也只在'津南实芹'和'黄太极'中被检测到.荧光定量PCR结果显示,AgCCD4在芹菜叶片中表达量最高,在根中最低.'紫杆一号'和'赛雪'叶片中AgCCD4的相对表达量相似,都显著高于'津南实芹'和'黄太极'.[结论]本研究从4种颜色芹菜中分别克隆得到AgCCD4,其中'赛雪'的基因序列和其他品种存在差异,其蛋白均含有RPE65保守结构域.AgCCD4表达量在芹菜不同组织中具有显著差异.芹菜中AgCCD4表达量与类胡萝卜素含量呈负相关.植物体中类胡萝卜素的含量和种类影响植株的颜色变化,AgCCD4可能通过降解类胡萝卜素来调控芹菜组织着色.