CRISPR/CAS9靶向肝癌细胞Oct3/4增强化疗药物作用效果的研究

• 作者: 张树交 查中明 武阳
• 来源期刊: 实用癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/CAS9 肝癌细胞 Oct3/4 化疗 索拉菲尼
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究|BASIC RESEARCH
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5930.2022.01.001

摘要

目的 探讨CRISPR/CAS9靶向敲除Oct3/4基因后化疗药物索拉菲尼(Sorafenib)对肝癌细胞的作用影响.方法 通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405和人肝正常细胞LX-2中Oct3/4的表达水平.通过CRISPR设计工具(http://crispr.mit.edu/)设计靶向Oct3/4的gRNA,并通过CRISPR/CAS9技术敲除肝癌细胞HepG2的Oct3/4,评估Oct3/4缺失情况下,化疗药物Sorafenib对肝癌细胞HepG2的凋亡水平和DNA损伤水平的影响.结果 Oct3/4在人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405中的mRNA表达水平显著高于人肝正常细胞LX-2(P<0.05);同时,Oct3/4在人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405中的蛋白表达水平也显著高于人肝正常细胞LX-2.使用CRISPR/CAS9对HepG2细胞进行基因编辑后,挑取嘌呤霉素筛选出的2个单克隆细胞株进行Oct3/4表达水平的检测,1#号单克隆细胞株Oct3/4表达水平低于野生型WT,2#号单克隆细胞株没有表达Oct3/4.测序后发现1#号基因组上的Oct3/4第1个外显子只有1条染色体缺失了2个碱基,另一条染色体并未缺失;2#号基因组上的Oct3/4第1个外显子2条染色体均存在不同程度的缺失,一条缺失2个碱基,另一条缺失4个碱基.使用Sorafenib处理野生型HepG2细胞和2#Oct3/4 KO HepG2细胞后,Oct3/4 KO细胞株的凋亡水平显著上升(P<0.05),DNA损伤水平显著上升(P<0.05).结论 Oct3/4基因的敲除能够显著提高化疗药物Sorafenib促肝癌细胞凋亡和DNA损伤的作用.