微孔板酶底物检测尿酸酶活性方法的建立及验证

• 作者: 张慧颖 江筠 张林焱 刘敏 秦荣浦 田石华 林惠娟 何成
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 尿酸酶 尿酸 酶活性检测 石英微孔板 酶标仪
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-34
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2022.01.005

摘要

目的 建立石英微孔板法酶底物检测尿酸酶活性的方法,并对方法进行验证.方法 摸索尿酸浓度与吸光度之间的线性关系,找到合适的范围,并验证方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性.尿酸酶加入固定浓度尿酸溶液,酶促反应5 min后,通过酶标仪检测A292nm值变化计算尿酸的含量,根据单位时间内尿酸减少量计算出尿酸酶的活性.结果 专属性验证结果显示,空白对照尿酸浓度未检出,25 μg/maL尿酸样品的回收率为102.0％,50 μg/mL尿酸用等体积的硼酸缓冲液稀释后的样品回收率为103.2％,表明专属性较好.尿酸质量浓度在0-50 μg/mL范围内线性关系良好,R2＞0.99.该方法重复性验证的RSD为0.6％;中间精密度验证的RSD为1.4％;准确性验证的3个样品回收率分别为101.3％、101.3％、101％,RSD分别为1.1％、1.2％、0.7％;不同温度条件下,耐用性验证的RSD为4.8％.结论 本实验建立了微孔板酶底物检测尿酸酶活性的方法,该方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性良好,可用于尿酸酶活性的定量检测.