牛ADIG基因启动子转录调控分析

• 作者: 唐林 魏大为 汪书哲 雷召雄 高晓茜 王兴平 马燕芬 马云
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 南阳牛 ADIG基因 启动子 转录调控 双荧光素酶报告基因
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种|ANIMAL GENETICS AND BREEDING
• 页码范围: 722-730
• 页数: 9页
• 分类号: S823.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.03.006

摘要

旨在构建脂肪生成素基因(adipohenin,ADIG)在牛不同组织中的表达谱,鉴定其核心启动子区域及关键转录因子,以期阐明其转录调控的分子机制.本研究采集3头((24±2)月龄)健康南阳公牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪组织,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组织中ADIG基因的相对表达量;克隆获得牛ADIG基因上游启动子区2 245 bp序列,构建6个pGL3-WT,与pRL-TK共转染293T细胞、原代脂肪细胞和3T3-L1细胞,进一步利用生物信息学预测其核心启动子区的关键转录因子.结果发现,ADIG基因在南阳牛肺(P＜0.05)、肾(P＜0.05)和皮下脂肪(P＜0.05)组织中高表达;克隆得到2 245 bp及其6段缺失片段序列的ADIG基因的启动子序列,成功构建了pADIG-1 621/+59、pADIG-1 288/+59、pADIG-850/+59、pADIG-589/+59、pADIG-321/+59和 pADIG-79/+59双荧光素酶报告载体,并检测到牛ADIG基因启动子核心区域在-321/-79;生物信息学初步预测牛ADIG基因核心区域含有C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子结合位点.综上,牛ADIG基因在皮下脂肪组织中表达量最高,其启动子核心区位于-321/-79,C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子对ADIG基因转录活性具有调控作用.本研究结果为探究ADIG基因在肉牛分子水平上的改良培育提供理论依据.