珍珠龙胆石斑鱼紧密连接蛋白基因Claudin-3与Claudin-12的克隆及精氨酸干预下的肠道表达

• 作者: 李广 崔晓 姚春凤 陈东鸿 何凯 陈冠霖 韩煜轩 杨奇慧 迟淑艳
• 来源期刊: 大连海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 珍珠龙胆石斑鱼 紧密连接蛋白 基因克隆 精氨酸
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Articles
• 页码范围: 61-70
• 页数: 10页
• 分类号: S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2021-083

摘要

为评价Claudin-3与Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂生长和肠道黏膜屏障中的作用,通过同源克隆及RACE PCR技术克隆珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3和Claudin-12基因的全长,采用qRT-PCR技术分析Claudin-3和Claudin-12基因在珍珠龙胆石斑鱼脑、鳃、皮肤、肌肉、肝脏、胃、前肠、中肠、后肠、头肾、体肾、脾和心脏13种组织的表达情况,并通过饲料精氨酸干预评估上述两个基因在肠道的表达情况.结果表明:Claudin-3 cDNA全长序列为1544 bp,包括一个153 bp的5′末端非翻译区(UTR)和743 bp的3′UTR,Claudin-3的开放阅读框(ORF)为648 bp,可编码215个氨基酸的蛋白,预测该蛋白相对分子质量为23100;Claudin-12 cDNA全长序列为1236 bp,包括一个118 bp的5′UTR和92 bp的3′UTR,Claudin-12的ORF为1026 bp,可编码341个氨基酸的蛋白,预测该蛋白相对分子质量为37400;系统进化树和氨基酸序列比对显示,珍珠龙胆石斑鱼Claudin-3与斜带石斑鱼亲缘关系最近,同源性最高,一致性高达98.14％,珍珠龙胆石斑鱼Claudin-12与的亲缘关系最近,同源性最高,一致性高达91.75％;Claudin-3和Claudin-12基因在被检测的13种组织中均有表达,Clau-din-3 mRNA在鳃和体肾中表达量最高(P<0.05),其次是中肠和肝脏,Claudin-12在脑中表达量最高(P<0.05),其次是中肠和后肠;饲料中精氨酸含量为3.06％时,珍珠龙胆石斑鱼增重率及肠道Claudin-3和Claudin-12基因表达水平显著高于1.96％和3.74％精氨酸组(P<0.05).研究表明,Claudin-3和Clau-din-12基因表达在适宜精氨酸水平的影响下上调,可维护石斑鱼肠道黏膜屏障完整,并促进鱼体生长.