b型流感嗜血杆菌结合疫苗游离多糖含量检测高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的建立及验证

• 作者: 赵丹 李茂光 毛琦琦 李亚南 陈苏京 叶强
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 化学
• 关键词: 高效阴离子交换色谱-脉冲安培法 超速离心 b型流感嗜血杆菌 游离多糖
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 79-84
• 页数: 6页
• 分类号: O657.7+5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用.方法 将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16h后,采用CarboPacPA-104 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-104 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量.对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限.用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较.结果 Hib多糖标准品在0.77～12.26 μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5％;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26％,RSD为3.96％.13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76％～16.74％.结论 该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路.