IL20RB、ATP6V0A1和STX10基因对PRRSV和PEDV的增殖作用

• 作者: 王金玉 上官爱哨 孙玉梅 蒋金河 刘忠柱 张淑君
• 来源期刊: 华中农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 基因敲除 CRISPR/Cas9技术 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪流行性腹泻病毒
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学·动物医学|Animal science?Veterinary medicine
• 页码范围: 176-184
• 页数: 9页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2022.02.021

摘要

为了明确IL20RB、ATP6V0A1和STX10基因对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的增殖作用,利用CRISPR/Cas9技术在PK15-CD163-Cas9细胞和IPEC-J2-Cas9细胞(笔者所在实验室前期制备)中分别敲除这3个基因,用PRRSV感染基因敲除的3种细胞(PK15-CD163-Cas9-ATP6V0A1、PK15-CD163-Cas9-IL20RB和PK15-CD163-Cas9-STX10),荧光定量PCR检测PRRSV的ORF7基因表达水平,分析PRRSV增殖情况;用PEDV感染基因敲除的3种细胞(IPEC-J2-Cas9-ATP6V0A1、IPEC-J2-Cas9-IL20RB和IPEC-J2-Cas9-STX10),荧光定量PCR检测PEDV的N蛋白基因表达水平,分析PEDV增殖情况.结果显示,在3个基因分别被敲除的PK15-CD163-Cas9-ATP6V0A1、PK15-CD163-Cas9-IL20RB和PK15-CD163-Cas9-STX10细胞中病毒基因ORF7表达水平均显著低于未敲除基因的细胞(PK15-CD163-Cas9-NC,对照组),在3个基因分别被敲除的IPEC-J2-Cas9-ATP6V0A1、IPEC-J2-Cas9-IL20RB和IPEC-J2-Cas9-STX10细胞中PEDV的N蛋白基因表达水平均显著低于未敲除基因的细胞(IPEC-J2-Cas9-NC,对照组),表明敲除这3个基因对PRRSV和PEDV增殖均具有显著的抑制作用,ATP6V0A1、IL20RB和STX10对PRRSV和PEDV增殖均具有重要调控作用.