基于CRISPR/Cas9技术构建Plin1基因敲除小鼠模型及表型分析

• 作者: 燕炯 冯晨毅 高学坤 许祥 杨佳敏 陈朝阳
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 围脂滴蛋白 CRISPR/Cas9技术 基因敲除 脂质代谢
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 173-180
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0647

摘要

利用CRISPR/Cas9技术构建纯合围脂滴蛋白(Plin1)基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型.针对Plin1基因2号外显子前后序列设计sgRNA并构建表达载体,体外转录获得sgRNA后与Cas9蛋白混合,显微注射至小鼠受精卵中并进行胚胎移植.出生小鼠经测序及PCR基因型鉴定获得Fo代阳性小鼠;令Fo代小鼠与野生型小鼠杂交,获得F1代杂合子小鼠;通过F1代杂合小鼠近交,获得F2代纯合子小鼠模型.常规饲喂同窝别Plin1基因敲除纯合小鼠、杂合小鼠和野生型小鼠,并测量小鼠体重、身长等体格参数;定量实时聚合酶链反应(Q-RT-PCR)和蛋白质印迹(WB)分别检测每个组织中Plin1基因在mRNA和蛋白质水平的表达.敲除了小鼠Plinl基因741 bp的片段(包含了 2号外显子在内);Plin1基因敲除小鼠PLIN1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);常规喂养4周后,相比于野生型及杂合型小鼠,纯合型Plin1基因敲除小鼠体重显著降低(P＜0.05).成功构建了Plin1基因敲除小鼠模型;初步表型分析发现,Plin1基因敲除小鼠与野生型小鼠相比较为瘦弱.