柯萨奇B组3型病毒SYBR GreenⅠRT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张伟 李咏洁 杨凤梅 李艳艳 靳玮华 徐鸿界 李明学 刘权 赵远 和占龙
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 柯萨奇病毒B组3型 SYBR GreenⅠRT-PCR
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2022.01.014

摘要

目的 建立一种灵敏、特异的柯萨奇B组3型(CV-B3)病原SYBR GreenⅠRT-PCR实时荧光定量检测方法,用于快速、准确地检测CV-B3.方法 设计柯萨奇B组病毒通用引物以及VP1基因的T7启动子特异性引物,以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线,建立CV-B3的荧光定量PCR检测方法;对检测方法的敏感度、特异性、重复性进行评价.结果 该检测方法在10～109拷贝/微升范围内具有良好的扩增效率和线性关系,最低检测限为10拷贝/微升,标准曲线r2=0.999,扩增效率为95.7％;且对柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)、柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)、肠道病毒71型(EV-71)均无交叉反应,重复性实验变异系数(CV％)<2％.结论 本实验建立的检测方法敏感度较高,同时具备良好的特异性及重复性,可用于CV-B3病原的临床及实验室样本的定性定量检测.