绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立

• 作者: 葛优 郑晶 蒲善秋 周宇 黄翠锐 杨光友 谢跃 何冉 徐璟 古小彬
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊痒螨兔亚种 MMP2 转录水平 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 567-575
• 页数: 9页
• 分类号: S852.746
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.02.023

摘要

本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA).通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清.结果 显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P＜0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0％和83.3％,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00％;该方法的临床检测呈现74.42％的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47％,9/86).PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测.