实时荧光RT-PCR法和NASBA方法在呼吸道多病原检测中的应用评价

• 作者: 李爱华 王雪 龚成 罗琴 罗明 李茂中 董梅 黄芳
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸道多病原 实时荧光RT-PCR方法 NASBA方法
• 年，卷（期）: 2022,（7）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用|Experimental Technology and Applications
• 页码范围: 1279-1283
• 页数: 5页
• 分类号: R117
• 语种: 中文

摘要

目的 评价实时荧光RT-PCR和核酸依赖性序列扩增法(NASBA)两种方法在呼吸道多病原检测中的应用价值.方法 收集北京地区急性呼吸道感染病例标本140份,分别采用实时荧光RT-PCR方法和NASBA方法对样本进行平行检测并对两种方法的病原检出限、重复性、检测一致性及检测时间等指标进行比较.结果 两种检测方法批内重复CV值均＜5％,重复性较好;实时荧光RT-PCR方法对脊灰毒株核酸和H1N1病毒核酸最低检出限分别为5.62 CCID50/0.1 ml(107倍稀释)和103倍稀释度,NASBA方法最低检出限分别为56.2 CCID50/0.1 ml(106倍稀释)和102倍稀释.实时荧光RT-PCR灵敏度略优于NASBA方法.针对两种方法共同检测呼吸道病原体种类,实时荧光RT-PCR和NASBA方法检测阳性率分别为89.28％(125/140)、70％(98/140).两种方法对甲型H1N1病毒、肠道病毒及新型冠状病毒的检测结果一致性达100％,对甲型流感病毒、甲型H3N2、副流感病毒1-4型的检测结果基本一致,Kappa值范围为0.81～1;对冠状病毒229E/HKU1/OC43/NL63、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和乙型流感病毒的检测结果一致性较好,Kappa值范围为0.61～0.80;对人偏肺病毒的检测结果一致性差,Kappa值仅为0.55.实时荧光RT-PCR方法检测时间为90 min,NASBA方法仅需40 min即可完成.结论 实时荧光RT-PCR方法灵敏度较高,适合对大批量临床样本进行筛查;NASBA方法检测时间短,不易污染,适用于时限性强但对灵敏度要求不太高的应用场景,如临床上重症呼吸道感染者的快速检测.建议根据不同需求和应用场景,选择合适的检测方法和产品.