摘要:

通过中药黄芪提取物对小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3增殖,细胞周期及胶原合成的影响,为黄芪在创伤愈合中的作用提供依据.试验以体外培养小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3,细胞传代,随机分为两组,对照组和药物干预组,加入不同浓度的黄芪提取物干预细胞24 h,分别采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期比例,羟脯氨酸试剂盒检测细胞胶原分泌含量.试验结果表明,黄芪提取物浓度为6.5× 10-5g/L时,吸光度与对照组相比,差异显著(P＜0.05),当黄芪提取物浓度为8×10-3g/L,1.6×10-3g/L,3.2×10-4g/L时,干预细胞24 h,吸光度较对照组差异极显著(P＜0.01).采用流式细胞术检测细胞周期同样证明了在浓度8×10-3g/L,1.6×10-3g/L,3.2×10-4g/L时干预细胞,S期比例较对照组差异极显著(P＜0.01),羟脯氨酸试剂盒检测黄芪提取物干预细胞合成胶原含量均有增加,且8×10-3g/L,1.6×10-3g/L浓度时,差异极显著(P＜0.01).从而表明,黄芪提取物能促进NIH-3T3细胞增殖,促进胶原合成.

摘要:

目的：探讨CD40/CD40L在冠心病发生发展中的作用，以及环孢素A(CsA)对CD40/CD40L是否具有抑制作用。提取各组患者外周血单个核细胞（PBMCs），应用流式细胞术检测各组CD40/CD40L表达水平，筛选出CD40/CD40L高表达组并给予不同浓度CsA（H1：0 mg/L；H2：0.01 mg/L；H3结果与N组相比，其他3组CD40表达水平均升高（均P<0.05），UAP组、AMI组较SAP组升高，UAP组与AMI组之间差异无统计学意义（P>0.05）；CD40L的表达在不同病变程度组间依次升高，两两比较差异均有统计学意义AMI组CD40/CD40L表达水平最高。不同浓度CsA处理后H1组CD40表达率高于H3组、H4组（均P<0.05）。CD40L表达率在H1组显著高于其他3组（均P<0.05）。结论 CD40/CD40L可能参与冠心病的发生发展，CsA可通过抑制CD40/CD40L从而延缓冠心病发展及改善预后。

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目的 探讨大鼠脑组织中CD40L和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在脑缺血再灌注损伤中的表达.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO).将Wistar大鼠随机分组,假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组,又分为6 h、24 h、48 h、72 h、7 d亚组).采用免疫组化法检测大鼠脑组织中CD40L、MMP-3的表达.结果 CD40L、MMP-3在假手术组不表达,再灌注6h后CD40L和MMP-3开始表达,24 h表达明显增加,48 h达高峰,72 h开始下降,7 d时有微量表达.神经功能评分与脑含水量变化与其一致.结论 大鼠脑组织中的CD40L、MMP-3参与了脑缺血再灌注损伤

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方法自10.3kb人apoE7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE7基因组DNA片段(6.0kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-Ⅰ)重组,构建pME7真核表达质粒,用Lipofectamine转染NIH/3T3细胞.结果瞬时表达结果表明,重组pME7质粒能够在NIH/3T3细胞中表达.稳定表达的结果则表明,人apoE7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关.ELISA测定结果显示,人apoE7基因在NIH/3T3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%.结论人apoE7

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目的：利用CRISPR/Cas9n系统在NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞系中敲除Asxl2基因。方法设计一对靶向小鼠Asxl2基因第5个外显子的小向导RNA（sgRNA），分别克隆进pX462载体。将测序鉴定正确的重组质粒转染至NIH3T3细胞中，利用有限稀释法得到单细胞，通过培养获得单克隆细胞系。提取单克隆细胞系基因组DNA，ge?notyping PCR扩增出靶位点附近的DNA片段并测序。将2个重组质粒共转染NIH3T3细胞，嘌呤霉素筛选后得到亚克隆细胞系，并且经genotyping PCR测序验证得到一株正确的单克隆细胞系。Western blot证实敲除Asxl2后，该NIH3T3细胞系中Asxl2蛋白表达缺失。结论通过这个系统得到了靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒及稳定敲除Asxl2的NIH3T3细胞系。

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目的:研究支气管哮喘(哮喘)发作期患儿的外周血T细胞表面协同刺激分子CD40及其配体CD40L的表达水平,及其与辅助性T细胞(helper T lymphocyte,Th)1、Th2表达率的关系.方法:应用流式细胞术检测30例哮喘患儿(哮喘组)和20名健康儿童(对照组)的外周血CD40及其配体CD40L的表达率和Th1、Th2的表达率[用中位数(全距)表示],比较2组的差异,利用Pearson相关分析CD40、CD40L的表达率和Th1、Th2的表达率的关系.结果:哮喘组和对照组外周血T细胞CD40表达率分别为11%～41%(21%)和7%～24%(15%),CD40L表达率分别为0.01%～0.80%(P＜0.05～0.01).CD40表达率与Th1、Th2表达率无相关性(r值分别为0.187和0.352,均为P＞0.05);CD40L表达率与Th1、Th2表达率亦无相关性(r值分别为-0.272和0.176,均为P＞0.05).结论:与健康儿童相比,哮喘患儿的外周血CD40及其配体CD40L的表达率分别升高和降低,提示其可能参与哮喘免疫发病的过程,但与Th1、Th2表达率无关,其具体机制有待深入的研究

摘要:

pssHGCMV-GFP.以此载体转染143细胞进行GFP重组腺相关病毒包装,产生重组报告病毒颗粒并作纯化.用地高辛标记的CMV polyA片段作为探针,采用斑点杂交方法检测重组病毒的物理滴度.采用氯化钙法体外转染培养的NIH3T3细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察其在细胞中的表达.结果成功构建了GFP重组腺相关病毒载体和报告病毒-VssCMV-GFP,所获病毒的滴度为3.16×1012病毒颗粒/mL.重组腺相关病毒VssCMV-GFP感染NIH 3T3细胞后48 h开始出现绿色荧光,并逐渐增强,至120h荧光更加集中且很强.结论 VssCMV-GFP对真核细胞具有感染能力,并且GFP可以在活细胞内有效表达,提示该重组腺相关病毒可应用于介导基因转移真核细胞进行基因治疗

摘要:

目的 研究头针电刺激对急性脑梗死大鼠脑组织中CD40、CD40L含量的影响.方法 将96只健康的雄性Wistar大鼠随机分为头针电刺激组、假手术组和模型对照组,每组又根据治疗的时间点不同分为4个亚组(1d,以疏密波进行电刺激治疗;假手术组及模型对照组大鼠在同一时间固定于针刺台,不做处理.于治疗前及治疗后第1天、第3天、第7天和第14天,检测脑组织中CD40、CD40L的表达.3组大鼠造模结束清醒后及治疗前后均进行Bederson评分.结果 治疗后第7天、第14天,头针电刺激组较模型对照组Bederson评分明显降低(P＜0.05);脑组织中CD40、CD40L的表达均明显降低(P＜0.01).其中头针电刺激组中治疗后14d脑组织中CD40、CD40L的表达、Bederson评分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 头针电刺激能显著改善急性脑梗死大鼠神经功能,从而改善肢体运动功能,其作用机制可能是抑制CD40、CD40L的表达,从而下调其介导的炎症及免疫分子生物学因素有关,且以治疗14d效果最优.

摘要:

目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达.方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLC-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒.应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3bGH和2BS/bGH.结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现.RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达.结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高.

摘要:

目的 将带有人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因的真核表达载体pL(E7-HB)SN导入NIH/3T3细胞进行瞬时表达。方法 重组质粒转染3T3细胞通过DNA-磷酸钙共沉淀法；E7基因表达的检测采用RT-PCR和间接免疫荧光实验。