抗人结肠癌单链抗体CL-3在大肠杆菌中的表达、复性和纯化

• 作者: 余征 张晓平 方永鑫 李力 林星石 蒋彦永 袁玫 费丽华 贾宝庆 闫锡蕴
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 包涵体 表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 1999,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 267-269
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.1999.04.009

摘要

目的:为得到单链抗体高效表达,我们对抗人结肠癌单链抗体 CL-3 在大肠杆菌中的表达、复性和纯化进行了研究.方法:以重组质粒表达载体 pJW2-CL-3 转化大肠杆菌DH5α,重组克隆在培基中温控诱导,以包涵体形式表达单链抗体.包涵体经溶解、复性、纯化后,以SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达蛋白,ELISA法鉴定单链抗体的免疫活性.结果:42 ℃诱导 5 h 蛋白表达量占菌体蛋白的 30%. 8 mol/L 尿素可将包涵体大部分溶解,稀释于复性缓冲液中静置 10 ℃ 48 h 以上可使包涵体蛋白复性.纯化峰经鉴定, 27 KD 处表达之蛋白为带有E-tag的抗人结肠癌单链抗体 CL-3,并证明其具有与抗原CEA特异性结合的功能,免疫活性与亲代抗体 CL-3 相似.结论:本研究获得的以包涵体形式在大肠杆菌中表达的抗人结肠癌单链抗体 CL-3,具有与亲代抗体相似的免疫活性,为高效表达单链抗体,用于肿瘤的诊断和治疗提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林星石	解放军总医院肿瘤生物研究室	19	89	5.0	8.0
2	袁玫	解放军总医院肿瘤生物研究室	45	314	10.0	16.0
3	李力	解放军总医院肿瘤生物研究室	23	142	8.0	11.0
4	蒋彦永	解放军总医院普通外科	27	144	8.0	11.0
5	贾宝庆	解放军总医院普通外科	37	183	7.0	12.0
6	余征	解放军总医院肿瘤生物研究室	9	56	5.0	7.0
7	张晓平	解放军总医院肿瘤生物研究室	5	13	2.0	3.0
8	闫锡蕴	中国科学院微生物研究所	2	1	1.0	1.0
9	费丽华	解放军总医院肿瘤生物研究室	3	12	1.0	3.0
10	方永鑫	解放军总医院肿瘤生物研究室	2	1	1.0	1.0