抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张平 毕建虹 蔡美英 赵宗蓉 魏大鹏 黎光
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: ScFv基因 构建和表达 ScFv活性
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-23
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 2702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.01.006

摘要

目的构建抗人AFP 单链抗体(ScFv)的基因并转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达.分离纯化ScFv并鉴定其生物活性.方法用RT-PCR方法从能分泌特异性抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗人AFP单链抗体的基因.将ScFv基因克隆至pGEM-T载体构建,用限制性内切酶切以及测序鉴定.将ScFv基因连接到pET32 (a+)质粒,转化BL-21(DE3)细菌.抗性生长的克隆用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4 h.溶解细菌并纯化ScFv,通过SDS-PAGE电泳及竞争抑制ELISA实验检测其活性.结果获得的VH含339 bp,来自小鼠IgG γ链,VL含312 bp,来自小鼠κ链. VH和VL通过编码(G4S)3连接肽的45 bp序列连接在一起构成含696 bp的ScFv基因.BL-21(DE3)中表达的ScFv抗体与融合蛋白(TrxA)融合在一起并以包涵体的形式存在.TrxA-ScFv相对分子质量约40×103,ScFv相对分子质量约24×103.竞争ELISA实验显示:TrxA-ScFv可抑制41%的McAb与抗原结合,而ScFv抗体则可抑制53%的McAb与抗原结合.结论我们成功构建了由696个碱基组成的抗人AFP单链抗体的基因,并在大肠杆菌获得了高效表达.该单链抗体具有较高的抗原结合活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡美英	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	49	260	8.0	13.0
2	赵宗蓉	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	8	50	3.0	7.0
3	张平	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	139	919	16.0	24.0
4	魏大鹏	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	81	405	10.0	16.0
5	毕建虹	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	6	34	4.0	5.0
6	黎光	四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室	4	11	3.0	3.0