跨膜突变型TNF-α的基因构建及体外表达

• 作者: 徐勇 曾劲杨 李卓娅 熊平 龚非力
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 跨膜型TNF-α(TM-TNF-α) 跨膜型TNF-α突变体(TM-TNFm-α) 一次PCR定位突变(S-PCR) 体外转录翻译
• 年，卷（期）: 1999,（6）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 254-256
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2432字
• 语种: 中文

摘要

目的:跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)易在某些蛋白酶的作用下转换为分泌型TNF-α(S-TNF-α).拟用基因突变技术获得稳定表达的、不能转换成S-TNF的TM-TNF突变体(TM-TNFm).方法:应用RT-PCR技术,从人外周血单核细胞中扩增出编码TM-TNF-α的全长cDNA序列并构建pBSK-TNF-α重组体.以此为模板,借助改进的"一次重组PCR"定位突变技术,造成TM-TNF转换为S-TNF酶切位点的缺失,获得TM-TNF突变重组体(TM-TNFm).结果:将TM-TNFm cDNA片段克隆至表达载体pGEM-3Zf,利用体外转录翻译系统表达出具有生物学活性的跨膜突变型TNF-α蛋白.经Western blot分析证实,用胶原酶不能将TM-TNF突变体酶解成为S-TNF.结论:提示所构建的TM-TNFm去除了可转换为S-TNF的酶解氨基酸序列,为进一步研究跨膜型TNF杀瘤作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚非力	同济医科大学免疫学教研室	20	216	8.0	14.0
2	熊平	同济医科大学免疫学教研室	8	82	4.0	8.0
3	李卓娅	同济医科大学免疫学教研室	6	67	3.0	6.0
4	徐勇	同济医科大学免疫学教研室	6	64	3.0	6.0
5	曾劲杨	同济医科大学免疫学教研室	1	2	1.0	1.0