A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达

• 作者: 刘平 曹文萍 朱静 李雪 胡琦 苑海刚
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: TGFBI 重叠延伸PCR 人角膜上皮细胞 转染
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 525-528
• 页数: 4页
• 字数: 3046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2015.0142

摘要

目的 构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础.方法 应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达.结果 重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、Xba Ⅰ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒.测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变.野生型及A546D突变型载体转粢入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达.结论 成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘平	哈尔滨医科大学附属第一医院眼科	211	863	12.0	19.0
2	李雪	哈尔滨医科大学附属第一医院眼科	56	211	7.0	10.0
3	胡琦	哈尔滨医科大学附属第一医院眼科	39	96	5.0	6.0
4	曹文萍	哈尔滨医科大学附属第一医院眼科	8	15	2.0	3.0
5	朱静	哈尔滨医科大学遗传学教研室	12	37	4.0	5.0
6	苑海刚	黑龙江省中医药大学附属第一医院普外科	5	30	2.0	5.0