突变型DNA聚合酶β真核表达载体的构建及其表达

• 作者: 董子明 赵四敏 赵国强 陈旭东
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 突变型DNA聚合酶β pcDNA4-C真核表达载体 EC 9706细胞
• 年，卷（期）: 2012,（17）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1716-1718
• 分类号: R735.1
• 字数: 3177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2012.17.017

摘要

目的 构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因(DNA polymerase β,polβ)的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达.方法 根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物(引物1、引物2),通过PCR扩增获得含BamHⅠ和ApaⅠ的基因序列,将其克隆入T载体,PCR及测序鉴定无误后,将其插入真核表达载体pcDNA4-C,从而构建了含突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ.将重组质粒以脂质体包裹的方式转染入polβ基因敲除的EC 9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.结果 经过PCR筛选及 DNA测序鉴定,证实真核表达载体pcDNA4-C-polβ构建成功.筛选后的EC 9706细胞经HislinkTM蛋白纯化试剂盒纯化,仅在39 kD位置有一条带,证明蛋白表达及纯化成功.结论 成功构建了食管癌突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,并纯化出polβ蛋白,为进一步研究polβ的功能奠定坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵国强	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
2	董子明	郑州大学基础医学院病理生理学教研室	237	965	14.0	19.0
3	陈旭东	漯河医学高等专科学校微生物学与免疫学教研室	51	140	7.0	10.0
4	赵四敏	漯河医学高等专科学校病理生理学教研室	11	42	4.0	6.0