半合成抗体库的构建及鉴定

• 作者: 刘群英 化冰 朱迎春 王琰 陈宇萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因文库 抗体生成 体外发生
• 年，卷（期）: 1999,（3）
• 所属期刊栏目: 基因工程抗体
• 页码范围: 238-241
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.1999.03.029

摘要

目的 构建半合成抗体库,不经免疫制备抗体. 方法 通过PCR法,从人胎肝DNA扩增基因组VH段基因,从Fd基因制备含有不同长度随机化CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段,然后用重叠PCR法构建Fd库,与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库. 结果 通过各种组合多次建库,获得总容量为4×108的半合成抗体库,其Fd段和轻链基因的重组率均大于90%,Fab表达率为50%.挑选20个克隆测定CDR3序列符合所设计的随机序列,用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体. 结论 所构建的半合成噬菌体抗体库可以用于不经免疫制备抗体.