分泌型磷脂酶A_2CDNA与载体PRC/CMV定向克隆及表达

• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 磷脂酶A2 定向克隆 NORTHERN杂交
• 年，卷（期）: 1999,（11）
• 页码范围: 3-4,79
• 页数: 3页
• 分类号: R394.8
• 语种: 中文

摘要

为了构建分泌型磷脂酶A2(SECRETARY PHOSPHOLIPASE A2,SPLA2) CDNA的有效表达系统,该文从无效表达的重组体SPLA2 － PGEM7 中制备SPLA2 片段,将其插入中间载体BLUESCRIPTBSSKR的ECOR1 位点,利用SPLA2－ BSSK重组体转化DH1 感受态细胞,筛选ANTISENSESPLA2－ BSSK 重组体,应用XBAL、HIND3 双酶消化该重组体并回收带有不同粘性末端的SPLA2 片段,因XBAL、HIND3 消化载体PRC/CMV,使之线性化并带有XBAL、HIND3 的粘性末端.SPLA2 定向插入PRC/CMV 载体,构建成具有CMV 强启动子的表达系统.重组体转染鼠巨噬细胞,扩增培养,从细胞中提取总RNA,NORTHERN 杂交法检测SPLA2 MRNA.结果表明PRC/CMV 可以用于SPLA2 表达及各种因素影响表达的研究.