抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析

• 作者: 任哲 冯炼强 宁波 崔蕴霞 林剑 王一飞 银巍
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 基因克隆 DNA序列分析
• 年，卷（期）: 2000,（7）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 353-355
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2337字
• 语种: 中文

摘要

目的:以重组人碱性成纤维细胞生长因子为抗原免疫小鼠,建立多株稳定分泌bFGF单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.并对bFGF单克隆抗体(McAb)可变区基因进行扩增及序列分析 .方法:采用Western blot法和免疫沉淀法对抗体特异性和Ig类型进行鉴定,同时,应用分子生物学技术,对Vk基因的DNA片段进行克隆,并对4a2Vk基因进行序列测定.结果:bFGF单克隆抗体可特异性结合人重组bFGF抗原,且均为IgM.由杂交瘤4a2、3d3细胞株扩增Vk基因是由330个碱基组成,编码110个氨基酸残基.通过国际联机检索进行EMBL和Kabat基因库扫描发现,4a2 Vk DNA仅与Ig同源,符合小鼠Ig的Vk基因特征;同源性为90%～98%,应归属于Ig的Vk基因.结论:杂交瘤4a2、3d3细胞株可稳定分泌bFGF单克隆抗体,并获得其轻链可变区基因,为进一步构建和表达单链Fv(ScFv)抗体打下良好的基础.