链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体

• 作者: 叶伟民 王永奎 罗荣城 陆慧琦 韩焕兴 黄忠文
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人源基因工程抗体 亲和层析 链球菌蛋白G
• 年，卷（期）: 2000,（5）
• 所属期刊栏目: 基因工程抗体和单克隆抗体
• 页码范围: 425-426
• 页数: 2页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2000.05.028

摘要

目的根据链球菌蛋白G与人抗体的Fab片段有弱结合位点的特征,探索应用蛋白G亲合纯化原核表达的人源mAb片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据.方法扩增抗HBs+菌株,经IPTG诱导表达后制备表达产物上清,与商品化链球菌蛋白G亲合胶(GammaBind)反应,PBS洗去非特异结合蛋白,梯度酸洗脱结合UV检测观察解离效果,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检验纯化产物的纯度,Dot Blot鉴定亲合纯化后Fab的抗原反应性,并与抗Fab抗体亲合纯化法进行比较.结果在酸洗脱的早期(pH4.5)即有特异蛋白解离,峰值在pH3.54.0之间,纯化后的抗体片段在PAGE中形成单一区带,达到电泳纯;酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带确为Fab蛋白区带;抗原特异Dot blot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性,且在得率和活性方面优于抗-Fab抗体法.结论本实验采用的一步亲合纯化法具有操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性mAb Fab片段纯化的较佳方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩焕兴	第二军医大学长征医院临床免疫中心	47	148	7.0	10.0
2	罗荣城	第一军医大学南方医院生物治疗中心	68	704	15.0	23.0
3	陆慧琦	第二军医大学长征医院临床免疫中心	38	118	6.0	9.0
4	叶伟民	第二军医大学长征医院临床免疫中心	20	98	5.0	9.0
5	王永奎	第二军医大学长征医院临床免疫中心	2	3	1.0	1.0
6	黄忠文	第二军医大学长征医院临床免疫中心	1	3	1.0	1.0