建立PCR-ELISA定量检测HBVDNA的技术

• 来源期刊: 肝脏
• 关键词: 聚合酶链反应 基因定量 酶联杂交 肝炎病毒 乙型
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 页码范围: 216-218
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒基因PCR及其产物酶联杂交定量分析技术.方法 制备了一种与野生扩增片段等长的PCR内参照 ;设计了一对HBV基因组S区基因扩增引物 ,上游引物的 5′ 端用生物素修饰 ,可同时扩增长为 319bp的野生和内参照片段.两套捕获探针可分别与竞争PCR产物中的野生片段和突变片段杂交.在同一反应管内 ,加入已知量内参照及待测HBVDNA标本 ,进行PCR扩增 ,然后用酶联杂交法进行产物分析.根据Clementi等介绍的公式计算待测标本中的HBVDNA含量.结果 灵敏度达到 10 -3fmol/L.在该法中 ,由于有PCR过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制 ,因此具有很高的特异性.结论 竞争PCR及其产物酶联杂交定量法是一种相对精确、灵敏度很高和特异性较强的HBV基因全定量测定技术 ,优于外参照法及其它产物定量法.