低免疫原性的新型葡激酶△NMSak在大肠杆菌中的高效表达和分离纯化

• 作者: 宋后燕 宋钢 莫炜
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 葡激酶 免疫原性 突变体 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 727-731
• 页数: 5页
• 分类号: Q753
• 字数: 3814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.06.005

摘要

为了降低野生型葡激酶(wild-type staphylokinase,wt-Sak)的免疫原性,对已构建的葡激酶N端缺失突变体(△NSak)cDNA进行改造,将其主要的抗原决定簇编码序列突变为丙氨酸密码子.该突变体(△NMSak)cDNA与原核表达载体pLY-4重组后,转化大肠杆菌JF1125.经温度诱导,△NMSak获得高效表达,重组蛋白占全菌总蛋白的60%,以包涵体形式存在.包涵体经洗涤,8mol/L尿素溶解,稀释复性,离子交换色谱一步分离至电泳纯,纯度达95%以上,分子量与理论值相符,比活性8.5×104HU/mg.经ELISA法、发色底物法测定,△NMSak与wt-Sak制备的兔抗wt-Sak抗血清的免疫反应性显著降低,经抗血清温育后,wt-Sak活性下降程度远高于△NMSak.△NMSak、Wt-Sak分别免疫豚鼠,以ELISA法测定豚鼠血清中相应抗体的效价,△NMSak组的抗体效价明显低于wt-Sak组,表明△NMSak的免疫原性显著下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋后燕	上海医科大学分子遗传学研究室	15	43	5.0	6.0
2	宋钢	上海医科大学分子遗传学研究室	4	15	2.0	3.0
3	莫炜	上海医科大学分子遗传学研究室	3	8	1.0	2.0