D-氨基酸氧化酶基因重组逆转录病毒载体的构建及表达

• 作者: 周虹 张雨生 王健民 翟勇平
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录病毒载体 DAAO基因 白血病细胞系
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 52-54
• 页数: 3页
• 分类号: R373.9|R733.7
• 字数: 2413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2001.01.016

摘要

目的：构建含D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因的重组逆转录病毒载体，初步观察DAAO基因的功能。方法：利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体（pLDAAOSN）中，以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA，用NIH3T3细胞测定病毒滴度，将重组逆转录病毒感染K562白血病细胞，G418筛选出抗性克隆，命名为KDAAO。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达，观察50mm/LD-丙氨酸对KDAAO杀伤作用。结果：经酶切鉴定和DNA测序证明重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒（5.2×106CFU/ml）。PCR、原位杂交分析证明DAAO基因已整合至KDAAO基因组中，并在mRNA水平表达。初步观察到D-丙氨酸能明显杀伤KDAAO。结论：重组逆转录病毒载体pLDAAOSN可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王健民	第二军医大学附属长海医院血液科	194	921	13.0	22.0
2	周虹	第二军医大学附属长海医院血液科	52	314	8.0	15.0
3	翟勇平	第二军医大学附属长海医院血液科	7	19	2.0	4.0
4	张雨生	第二军医大学附属长海医院血液科	9	28	3.0	5.0