登革2型病毒全长cDNA克隆定点诱变的OL-PCR方法

• 作者: 于曼 杨佩英 王鹏程 秦鄂德 耿丽卿 胡志君 范宝昌 赵卫 陈水平
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革2型病毒 cDNA克隆 定点诱变 OL-PCR
• 年，卷（期）: 2001,（6）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 662-665
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 字数: 4565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.06.025

摘要

目的对带有登革2型病毒(DEN-2)全长cDNA的质粒pDVWS501上E62、E203位点进行定点诱变. 方法设计4对点诱变引物,运用OL-PCR(overlap PCR)法,扩增出分别在E62或E203位带有点突变的2条DNA片段,克隆至T载体,获T-TB62、T-TB203两个克隆.将T-TB62用ClaⅠ和SphⅠ分别酶切,T-TB203用SphⅠ+NheⅠ酶切后,用T4连接酶分别连接至pDVWS501,获重组质粒TB62和TB203.对TB62和TB203进行序列测定. 结果成功得到分别在E62、E203位带有点突变的TB62、TB203克隆. 结论 OL-PCR法是具有较高突变效率的定点诱变方法.