重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应

• 作者: 刘楠 奚永志 孔繁华 屠敏 郑黎燕 金荔 陈兴国
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组细胞因子-毒素融合蛋白 IL-6-PE40 基因克隆
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 95-98
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 3501字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.01.031

摘要

目的 构建重组人白细胞介素6-绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL-6D24-PE40,以选择性杀伤高表达IL-6受体（IL-6R）的肿瘤细胞和白血病细胞。方法 采用重叠延伸的基因融合技术将N-末端缺失24个氨基酸的重组人白细胞介素6（IL-6D24）cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合，构建IL-6D24-PE40融合基因。利用HB101/pBV220表达系统，实现了IL-6D24-PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达，经MonoQ柱进行层析纯化，采用MTS法检测细胞毒活性。结果 IL-6D24-PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到40%～60%。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度>95%的融合蛋白。Westernblot证明，纯化的融合蛋白与IL-6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实，IL-6D24-PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL-6R的U937细胞，ID50约为250ng/ml，而对不表达IL-6R的CEM细胞无杀伤作用。结论 IL-6D24-PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL-6R的靶细胞,有希望成为导向治疗高表达IL-6/IL-6R系统的某些白血病和其他肿瘤的新型导向药物。