人肺表面活性物质相关蛋白A1基因在大肠杆菌中的表达及产物的分离纯化

• 作者: 任大明 兰和魁 姬毅 封志纯 郑维扬 黄建生
• 来源期刊: 中华儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺表面活性剂 蛋白脂质类 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 227-230
• 页数: 4页
• 分类号: R516
• 字数: 2882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0578-1310.2001.04.010

摘要

目的研究人肺表面活性物质相关蛋白A1（SP-A1）在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法将人SP-A1基因克隆至表达载体pGEX-2T上，分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、XL1-blue和BL21（DE3）等不同宿主，并在不同温度中的表达，采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白，用ELISA及Westert blot初步分析SP-A1蛋白的免疫原性，融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP-A1基因在前4种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质，目的蛋白质分别占总蛋白的6.7%、9.8%、9.3%、14.8%；于28℃时，该基因在BL21（DE3）宿主中表达产物均为完整蛋白质，占总蛋白质的10％。经包涵体纯化和Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化，可获得纯度达95%以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP-A多克隆抗体特异识别，凝血酶作用后可切出相对分子质量为26 000的目的蛋白质片段。结论人组织特异性蛋白质SP-A1可在大肠杆菌中表达，表达产物具有良好的免疫原性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	封志纯	第一军医大学附属珠江医院儿科	89	474	11.0	17.0
2	任大明	复旦大学遗传研究所	98	819	15.0	24.0
3	郑维扬	第一军医大学附属南方医院血液科	16	52	4.0	6.0
4	姬毅	第一军医大学附属珠江医院儿科	3	10	2.0	3.0
5	黄建生	复旦大学遗传研究所	16	86	6.0	8.0
6	兰和魁	第一军医大学附属珠江医院儿科	9	44	4.0	6.0