人热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及纯化

• 作者: 傅庆国 刘金钢 孔凡民 孙宏治 李航宇 翟振华 郭仁宣 隋春阳
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白70 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 临床医学
• 页码范围: 564-565,568
• 页数: 3页
• 分类号: R735.8
• 字数: 2109字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0258-4646.2005.06.032

摘要

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的原核表达载体,诱导其表达并纯化.方法:应用PCR技术从人胆管癌组织中扩增出HSP 70基因片段,经T-A克隆连接到末端经平滑处理后的pMD18-T Simple质粒并测序.利用双酶切技术构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-HSP 70,并转化大肠杆菌JM 109,经IPTG诱导后表达得到HSP70融合蛋白.应用Glutathione-Sepharose4B亲和层析柱提纯融合蛋白,用生物素化凝血酶分离并纯化目的蛋白,最后行Wsetern blot鉴定.结果:PCR扩增结果与预计目的基因大小一致;序列分析与GeneBank中收录完全一致;重组表达载体pGEX-4T-1-HSP 70构建成功;Western blot结果显示目的蛋白可以与兔抗人的HSP70单克隆抗体特异性结合.结论:HSP 70编码序列已经成功克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,并在大肠杆菌JM 109中获得表达.