人源性热休克蛋白70在大肠杆菌中的表达及鉴定

• 作者: 吴开春 宁晓暄 时永全 李源 樊代明
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白70 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 973-975
• 页数: 3页
• 分类号: R730.3
• 字数: 2127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2002.11.011

摘要

为在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70(HSP70)的基因,以质粒为模板,采用PCR方法进行扩增,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,回收大小约1.96kb的片段;回收片段经T-A克隆法克隆到pUCm-T载体上,并进行DNA测序;将目的基因片段从pUCm-T载体上酶切后,亚克隆到表达载体pET-21a(+)上;将重组质粒pET-21a(+)/ HSP转化大肠杆菌,经IPTG诱导后,收集细菌,菌体裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测. 结果表明,应用PCR方法扩增出约1.96kb的目的片段,序列测定结果证实,扩增的HSP70基因序列与GeneBank中HSP70 cDNA序列一致;经EcoR Ⅰ+Xho Ⅰ酶切及PCR鉴定证实,HSP70基因成功地克隆到原核表达载体pET-21a(+)上;转入重组质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE,发现在分子量为72 000处有表达量明显增多的蛋白条带,Western blot证实其为目的条带. 表明在大肠杆菌中已成功地表达了HSP70基因.