一个通用的TNFHis温度诱导融合表达载体的构建

• 作者: 张英起 石继红 韩苇 颜真
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: TNFHis温度诱导融合表达载体 PL启动子 PR启动子 pBVTNF 6×His序列
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 317-321
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3201字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2002.06.002

摘要

以pBVTNF为起始质粒,设计合成了2个DNA片段:一个含有起始码、TNF起始码后的2个氨基酸序列和6个组氨酸序列;另一个含有Thrombin和hydroxylamine裂解位点序列.将上述2个合成DNA片段分别与pBVTNF载体重组,获得了一个通用的TNFHis表达载体.在该表达载体中,含有6×His的纯化标签和Thrombin和hydroxylamine融合蛋白裂解位点.分别将IFN﹑ IL-11和TNF基因插入该表达载体的多克隆位点,42℃诱导表达后,经SDS-PAGE分析,结果表明,所有插入基因都获得了较高水平的表达.薄层扫描结果证实,所有融合表达蛋白的表达量均占菌体总蛋白的20%以上.Western blot 检测显示,所有融合表达蛋白均可与抗TNF-α单抗发生免疫反应,间接证明融合蛋白均获得了表达.TNFHisTNF和TNFHisIFN在温度诱导表达后,菌体裂解液经Ni-NTA Agarose Beads亲和柱纯化,纯化结果表明,TNFHis中的6×His序列可与Ni-NTA Agarose Beads结合.此种纯化方式为融合表达蛋白的分离纯化提供了方便.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜真	第四军医大学生物技术中心	84	776	12.0	25.0
2	张英起	第四军医大学生物技术中心	124	825	12.0	23.0
3	石继红	第四军医大学生物技术中心	31	415	8.0	20.0
4	韩苇	第四军医大学生物技术中心	46	459	9.0	20.0