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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定
huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定
作者:
丁云菲
刘红岩
孙强明
徐维明
戴长柏
李洪钊
马雁冰
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
IL-6
GM-CSF
融合蛋白
克隆
基因表达
摘要:
目的构建及表达具有huIL-6和huGM-CSF双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127) 融合蛋白分子.方法应用PCR技术对huIL-6和huGM-CSF的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3, 克隆PCR产物,并构建成pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)表达质粒,将表达质粒导入E.coli DH5α中,诱导表达融合蛋白.通过Q Sepharose H.P. 离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用MTT法测量其huIL-6和huGM-CSF生物学活性.结果 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)的序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli DH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过Q Sepharose H.P.离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到96%以上.融合蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的双重生物学活性,其促进huIL-6依赖细胞株B9和huGM-CSF依赖细胞株TF-1增殖的比活性分别为2.86×107 U/mg和3.33×108 U/mg.结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白.
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文献信息
篇名
huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定
来源期刊
免疫学杂志
学科
生物学
关键词
IL-6
GM-CSF
融合蛋白
克隆
基因表达
年,卷(期)
2002,(4)
所属期刊栏目
基础免疫学
研究方向
页码范围
253-257
页数
5页
分类号
Q786
字数
4248字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1000-8861.2002.04.004
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
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(0)
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研究主题发展历程
节点文献
IL-6
GM-CSF
融合蛋白
克隆
基因表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
免疫学杂志
主办单位:
第三军医大学
中国免疫学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-8861
CN:
51-1332/R
开本:
大16开
出版地:
重庆市沙坪坝区高滩岩
邮发代号:
78-32
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
4652
总下载数(次)
25
总被引数(次)
27928
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英文译名:
官方网址:
项目类型:
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学科类型:
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