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摘要:
目的构建及表达具有huIL-6和huGM-CSF双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127) 融合蛋白分子.方法应用PCR技术对huIL-6和huGM-CSF的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3, 克隆PCR产物,并构建成pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)表达质粒,将表达质粒导入E.coli DH5α中,诱导表达融合蛋白.通过Q Sepharose H.P. 离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用MTT法测量其huIL-6和huGM-CSF生物学活性.结果 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)的序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli DH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过Q Sepharose H.P.离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到96%以上.融合蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的双重生物学活性,其促进huIL-6依赖细胞株B9和huGM-CSF依赖细胞株TF-1增殖的比活性分别为2.86×107 U/mg和3.33×108 U/mg.结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白.
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文献信息
篇名 huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定
来源期刊 免疫学杂志 学科 生物学
关键词 IL-6 GM-CSF 融合蛋白 克隆 基因表达
年,卷(期) 2002,(4) 所属期刊栏目 基础免疫学
研究方向 页码范围 253-257
页数 5页 分类号 Q786
字数 4248字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1000-8861.2002.04.004
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节点文献
IL-6
GM-CSF
融合蛋白
克隆
基因表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
免疫学杂志
月刊
1000-8861
51-1332/R
大16开
重庆市沙坪坝区高滩岩
78-32
1985
chi
出版文献量(篇)
4652
总下载数(次)
25
总被引数(次)
27928
相关基金
云南省自然科学基金
英文译名:
官方网址:
项目类型:面上项目
学科类型:
论文1v1指导