人EC-SOD的克隆及高效表达

• 作者: 吴祥甫 杨冠珍 范立强 袁勤生 贺华君
• 来源期刊: 华东理工大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: EC-SOD 大肠杆菌 昆虫杆状病毒 基因克隆 基因表达 SOD
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 页码范围: 39-42,62
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-3080.2002.01.011

摘要

将编码人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a(+)中构建表达质粒pET-EC-SOD,表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达3h～5h后,产生较多的重组人EC-SOD,并形成包含体.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上.经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1 200U.将EC-SOD cDNA基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,重组杆状病毒BacHT-EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞,经扩增后在细胞内进行表达.SDS-PAGE分析结果表明,粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带,Western blot分析表明,该特异条带即为EC-SOD蛋白,连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁勤生	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所	151	1535	22.0	29.0
2	吴祥甫	中国科学院上海生物化学研究所	78	677	14.0	24.0
3	范立强	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所	37	149	7.0	11.0
4	贺华君	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所	8	65	5.0	8.0
5	杨冠珍	中国科学院上海生物化学研究所	17	41	4.0	6.0