大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化

• 作者: J.C.JANSON 安利佳 杨青 胡学军 苏志国 许小明 高晓蓉
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 类凝血酶 克隆 表达 纯化 特性表征
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 390-393
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.03.012

摘要

根据同源性分析设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,之后将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+Mut+在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到:Q Sepharose FF和Benzamidine-Sepharose 4BCL.与天然蛇毒类凝血酶一致,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽,但在0℃下很稳定.该酶的最适pH为8.0.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安利佳	大连理工大学化工学院	201	3121	29.0	45.0
2	杨青	大连理工大学化工学院	29	142	7.0	11.0
3	苏志国	中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室	155	1885	23.0	35.0
4	高晓蓉	大连理工大学化工学院	28	500	12.0	21.0
5	胡学军	大连理工大学化工学院	10	61	5.0	7.0
6	许小明	大连理工大学化工学院	1	18	1.0	1.0