新疆出血热病毒核蛋白基因的高效表达及其在诊断中的初步应用

• 作者: 杭长寿 王世文 解燕乡 马本江
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 克里米亚-刚果出血热 核蛋白 序列测定 高效表达 诊断
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 572-577
• 页数: 6页
• 分类号: R51
• 字数: 4399字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.05.036

摘要

目的克隆并测定了克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)中国分离株(新疆出血热病毒,XHFV)BA88166株核蛋白 (NP)基因的序列并实现其在细菌中的高效表达与临床诊断的应用. 方法病毒RNA经RT-PCR扩增出完整的NP基因.将扩增产物进行序列分析并克隆至融合表达载体pET32a,使重组质粒在大肠杆菌BL-21中高效表达.将融合蛋白经初步纯化后包被ELISA板用于抗体检测. 结果 XHFV BA88166株NP基因序列以及推导的氨基酸序列与其它XHFV的NP基因和蛋白序列同源性较高,在进化树上形成独立的分支.BA88166株NP基因编码482个氨基酸的核蛋白,推测的相对分子质量(Mr)约为54×103.在细菌中表达的融合蛋白经印迹试验证明具有良好的抗原性.以所建立的ELISA方法检测疫区人和动物血清的结果与IFA一致,并与临床诊断有很好的符合率.结论 BA88166株与其它XHFV BA66019、BA8402的NP基因在进化上关系密切,综合M基因的序列分析结果,人源分离株BA88166可能是来自蜱的BA8402变异株.表达于细菌中的核蛋白可作为安全的诊断性抗原用于临床检测及流行病学调查,所建立的方法准确、特异、简便、快速.